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      1. 測定食品中的氨基酸
        來源/作者:中國標準物質網  日期:2014-8-1 11:49:15

        一、案例

        目前市場上有眾多氨基酸保健食品,隨著人們生活水平的不斷提高,氨基酸類保健食品逐漸成為保健品市場的暢銷產品,人體氨基酸模式決定了人們對不同氨基酸的需要量不同,如何能夠更好地吸收保健食品中的氨基酸,防止必需氨基酸補充的不合理,需要我們對食品中不同種類的氨基酸含量進行測定,很多國家和地區都采用氨基酸自動分析儀法對食品中各類氨基酸進行定量分析。

        二、選用的國家標準

        GB/T 5009.124—2003食品中氨基酸的測定——自動分析儀測定法。

        三、測定方法

        1.試樣處理

        試樣用勻漿機勻漿后在低溫冰箱中冷凍保存,需要時解凍使用。

        2.稱樣

        準確稱取勻漿好的試樣,試樣蛋白質含量在10~20mg范圍內。

        3.水解

        在水解管中加入6mOl/L鹽酸10~20mL,含水量高的試樣可加入等體積的濃鹽酸,加入新蒸餾的苯酚3~4滴,再將水解管放入冷凍劑中冷凍3~5min,然后連接真空泵,抽真空后充入高純氮氣,反復三次擰緊螺絲蓋,將充滿氮氣封口的水解管放在(110±1)℃恒溫干燥箱內,水解22h后,取出冷卻。過濾水解液,多次沖洗水解管,將水解液移入50ml容量瓶中定容,吸取1ml。濾液于5mL容量瓶中,用真空干燥器在40~50℃下干燥,殘留物用1~2mL水溶解,再干燥,反復兩次,最后蒸干,用1mlpH一2.2的緩沖溶液溶解,待測。

        4.測定

        準確吸取0.200mL混合氨基酸標準溶液,用pH=2.2的緩沖溶液稀釋到5mL,此標準溶液稀釋濃度為5.00mol/μL,作為測定用的氨基酸標準溶液,用氨基酸自動分析儀以外標法測定試樣液的氨基酸含量。

        5.結果計算

        X=C*1/50*F*V*m/m*109*100

        式中 X——試樣氨基酸的含量,g/100g;

        f一一試樣測定液中氨基酸的含量,nmol,。50"L;
        F——試樣稀釋倍數;
        V——水解后試樣定容體積,mL;
        M——氨基酸的相對分子質量;
        m——試樣質量,g;
        1/50——一折算成每毫升試樣測定的氨基酸含量.μmol/l;
        109一將試樣含量由納克折算成克的系數。

        6.標準圖譜

        如表1所示。
        表1氨基酸出峰順序及保留時間

        出峰順序

        保留時間/min

        出峰順序

        保留時間/min

        1

        天冬氨酸

        5.55

        9

        蛋氨酸

        19.63

        2

        蘇氨酸

        6.60

        10

        異亮氨酸

        21.24

        3

        絲氨酸

        7.09

        11

        亮氨酸

        22.06

        4

        谷氨酸

        8.72

        12

        酪氨酸

        24.52

        5

        脯氨酸

        9.63

        13

        苯丙氨酸

        25.75

        6

        甘氨酸

        12.24

        14

        組氨酸

        30.41

        7

        丙氨酸

        13.10

        15

        賴氨酸

        32.57

        8

        纈氨酸

        16.65

        16

        精氨酸

        40.75

        7.試劑

        ①濃鹽酸。

        ②6mol/L濃鹽酸:濃鹽酸與水1+1混合。

        ③苯酚:需重蒸餾。

        ④0.0025mol/l混合氨基酸標準溶液。

        ⑤緩沖溶液:pH一2.2的檸檬酸鈉緩沖溶液,pH一3.3的檸檬酸鈉緩沖溶液,pH一4.0的檸檬酸鈉緩沖溶液,pH一6.4的檸檬酸鈉緩沖溶液。

        ⑥茚三酮溶液。

        a.pH=5.2的乙酸鋰溶液:氫氧化鋰(LiOH·H2 O)168g,加冰乙酸279mL,加水稀釋到1000mL,用濃鹽酸或50Og/L氫氧化鈉溶液調至pH一5.2。

        b.茚三酮溶液:取150mL二甲基楓(C2 H6OS)和乙酸鋰溶液50mL加入4g水和茚三酮(C9H4O3·H2O及0.12g還原茚三酮(C18H10O6·2H2O)攪拌至完全溶解。

        ⑦高純氮氣:純度99.99%。

        ⑧冷凍劑:市售食鹽與冰1+3混合。

        8.實驗儀器

        ①真空泵。

        ②恒溫干燥箱。

        ③水解管:耐壓螺蓋玻璃管或硬質玻璃管,體積20~30mL,用去離子水沖洗干凈并烘干。

        ④真空干燥器。

        ⑤氨基酸自動分析儀。

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